Kľúčový rozdiel - teplá vs studená trypsinizácia
Teplá a studená trypsinizácia sú dve metódy používané pri enzymatickej dezagregácii buniek pri kultivácii živočíšnych buniek. Kľúčový rozdiel medzi teplým a studeným trypsinizáciou, ako už názvy napovedajú, závisí od teploty, pri ktorej sa trypsín pridáva pre bunkovú dezagregáciu. Teplá trypsinizácia prebieha za vyšších teplotných podmienok (36,5 - 37 ° C), zatiaľ čo studená trypsinizácia prebieha za nízkych teplôt.
Počas procesu primárnej bunkovej kultivácie živočíšnych buniek sa používajú tri hlavné metódy, ktoré sa osvedčili. Tieto tri metódy zahŕňajú mechanickú dezagregáciu buniek, enzymatickú dezagregáciu buniek a primárnu explantačnú techniku. Enzymatická dezagregácia buniek, ktorá vedie k izolácii buniek, sa uskutočňuje pomocou proteínu degradujúceho enzýmu trypsínu. Preto je tento proces známy ako trypsinizácia. Trypsinizáciu je možné vykonať za dvoch rôznych podmienok, a to teplej trypsinizácie a studenej trypsinizácie. Teplá trypsinizácia je metóda ošetrenia buniek trypsínom za teplých podmienok pri teplote 36,5 - 37 0.C. Studená trypsinizácia je proces úpravy trypsínom, ktorý sa uskutočňuje za chladnejších podmienok, prednostne v ľade pri veľmi nízkych teplotách.
OBSAH
1. Prehľad a hlavný rozdiel
2. Čo je to teplá trypsinizácia
3. Čo je to studená trypsinizácia
4. Podobnosti medzi teplou a studenou trypsinizáciou
5. Porovnanie vedľa seba - teplá vs. studená trypsinizácia v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie
Čo je teplá trypsinizácia?
Môže sa uskutočniť trypsinizácia na disagregáciu bunkových zložiek za účelom izolácie buniek za vzniku primárnej bunkovej kultúry. Trypsín je enzým odbúravajúci bielkoviny a enzýmovou zmesou použitou pri trypsinizácii môže byť buď surový extrakt alebo purifikovaný produkt. Surový extrakt je považovaný za účinnejší pri lýze bielkovín a rozpade buniek, pretože obsahuje ďalšie degradačné enzýmy.
Teplá trypsinizácia je najbežnejšie používanou enzymatickou metódou na dezagregáciu buniek, ktorá prebieha za vyšších teplotných podmienok. Pred liečbou trypsinizáciou sa požadované tkanivo rozseká na menšie kúsky. Uľahčuje proces ľahkej dezagregácie. Nasekané tkanivo sa potom premyje v špeciálnom médiu známom ako médium Dissection Basal Salt.
Po ukončení premývacieho kroku sa bunky transformujú do banky obsahujúcej aktívny enzým, ktorým je trypsín. Pretože táto technika predpokladá teplý protokol trypsinizácie, trypsín sa umiestni na teplotu okolo 37 ° C asi na štyri hodiny.
Obrázok 01: Trypsín
Obsah sa zmieša a mieša pomocou centrifugačných metód, aby sa uľahčil protokol a urýchlil proces dezagregácie. Akonáhle je dosiahnutý odporúčaný čas, bunky môžu byť odvodené od supernatantu. Bunky odvodené od supernatantu sa potom inkubujú pri konkrétnej teplote a čase.
Čo je to studená trypsinizácia?
Studená trypsinizácia je druhý typ trypsinizácie, ktorý prebieha za studených podmienok. Pri tejto technike sa bunky, ktoré sa nasekajú a premyjú, umiestnia do liekoviek na ľad a potom sa namočia trypsínom. Doba máčania je oveľa dlhšia - asi 6 - 24 hodín.
Po dokončení postupu namáčania sa trypsín odstráni z bunkového lyzátu a kúsky tkaniva sa ďalej inkubujú pri teplote 37 ° C počas asi 20 - 30 minút. Disagregácia buniek sa dosiahne opakovanou pipetovaním tkanivovej zmesi. Toto umožní bunkám disociovať z membrány a prísť k supernatantu. Akonáhle sú bunky v supernatante, sú inkubované a pestované pri požadovanej teplote a časovom období.
Metóda studenej trypsinizácie má niekoľko výhod
- Vyšší výťažok životaschopných buniek, pretože sa minimalizuje poškodenie buniek. Poškodenie buniek je minimalizované nepoužívaním krokov odstreďovania.
- Veľmi pohodlná metóda.
- Menej pracné.
Hlavným obmedzením metódy studenej trypsinizácie je, že veľké množstvá nemožno použiť v jednom prípade.
Aké sú podobnosti medzi teplou a studenou trypsinizáciou?
- Teplý aj studený proces trypsinizácie používajú na dezagregáciu buniek enzým trypsín.
- Teplý aj studený trypsinizačný proces sa používa v postupoch bunkovej kultúry na dezagregáciu buniek.
- Pri procedúrach na teplú aj studenú trypsinizáciu sú bunky odvodené od supernatantu.
Aký je rozdiel medzi teplou a studenou trypsinizáciou?
Rozdielny článok v strede pred tabuľkou
Teplá vs studená trypsinizácia |
|
| Teplá trypsinizácia je metóda ošetrenia buniek trypsínom za teplých podmienok pri teplote 36,5 - 37 0. | Studená trypsinizácia je proces úpravy trypsínom, ktorý sa uskutočňuje za chladnejších podmienok, prednostne v ľade s veľmi nízkymi teplotami. |
| Protokol | |
| Nasekané kúsky tkaniva sa počas celého postupu nepretržite udržiavajú na teplote 37 ° C. | Nasekané kúsky tkaniva sa spočiatku udržiavajú na ľadovo chladných teplotách a potom sa udržiavajú na 37 ° C. |
| Teplota | |
| Teplá trypsinizácia nastáva pri 36,5 - 37 0 | Studená trypsinizácia nastáva pri ľadovo nízkych teplotách. |
| Čas spotrebovaný | |
| Na celý proces (asi 4 hodiny) teplej trypsinizácie je potrebných menej času. | Na studenú trypsinizáciu je potrebný dlhší čas (okolo 6 - 24 hodín). |
| Výťažok životaschopných buniek | |
| Nízka teplá trypsinizácia. | Vysoký obsah studenej trypsinizácie. |
| Použitie centrifugácie | |
| Odstreďovanie je potrebné na dezagregáciu buniek pri teplej trypsinizácii. | Pri studenej trypsinizácii sa centrifugácia nevyžaduje. |
| Počiatočné množstvo tkaniva pre trypsinizáciu | |
| Pri teplej trypsinizácii sa môže použiť väčšie množstvo tkaniva. | Pri studenej trypsinizácii sa môže použiť menšie množstvo tkaniva. |
| Poškodenie bunky | |
| Vysoká kvôli centrifugácii pri teplej trypsinizácii. | Menej kvôli studenej trypsinizácii. |
Zhrnutie - teplá vs studená trypsinizácia
Trypsinizácia je metóda použitia enzýmu štiepiaceho proteíny trypsín na disagregáciu a prípravu primárnych bunkových kultúr počas procesu kultivácie buniek. Existujú dve hlavné techniky trypsinizácie založené na teplotách použitých počas postupu. Sú to teplé a studené trypsinizácie. Teplá trypsinizácia sa uskutočňuje pri teplote 37 ° C, zatiaľ čo studená trypsinizácia sa uskutočňuje za studena. Aj keď je dokončenie studenej trypsinizácie dlhší čas, hovorí sa, že má vyšší výťažok životaschopných buniek. Je to tak kvôli skutočnosti, že pri studenej trypsinizácii je poškodenie buniek minimalizované, pretože nepoužíva intenzívne kroky odstreďovania. To je rozdiel medzi teplou a studenou trypsinizáciou.
