Kľúčový rozdiel - Gram Stain vs. Acid Fast
Baktérie sú veľmi malé mikroorganizmy. Sú priehľadné a ich detekcia je za životných a nepoškvrnených podmienok náročná. Na uľahčenie detekcie baktérií sú teda vyvinuté rôzne metódy farbenia. Existujú tri hlavné typy farbiacich techník: jednoduché farbenie, rozdielne farbenie a štrukturálne farbenie. Diferenciálne farbenie je technika, ktorá používa na odlíšenie baktérií viac ako jedno farbenie. Gramové farbenie a acidorezistentné farbenie sa najpopulárnejšie nazýva diferenciálne farbenie. Gramovo farbenie je technika diferenciálneho farbenia, ktorá rozdeľuje baktérie do dvoch skupín známych ako grampozitívne baktérie a gramnegatívne baktérie. Kyselinovzdorné zafarbenie je rozdielne zafarbenie používané na identifikáciu acidorezistentných organizmov, ako je Mycobacterium, z nekyslých rýchlych organizmov. Toto je kľúčový rozdiel medzi Gramovým farbením a Acid Fast farbením.
OBSAH
1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je to Gram Stain
3. Čo je Acid Fast
4. Podobnosti medzi Gram Stain a Acid Fast
5. Porovnanie vedľa seba - Gram Stain vs. Acid Fast v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie
Čo je Gram Stain?
Gramovo farbenie je dôležitá technika diferenciálneho farbenia používaná na bakteriálnu identifikáciu v mikrobiológii. Túto techniku zaviedol dánsky bakteriológ Hans Christian Gram v roku 1884. Gramové farbenie kategorizuje baktérie do dvoch hlavných skupín pomenovaných grampozitívne a gramnegatívne, ktoré sú veľmi dôležité pri klasifikácii a identifikácii baktérií. Mikrobiológovia uskutočňujú farbenie gramov ako počiatočný krok v charakterizácii baktérií počas svojich štúdií.
Baktérie sú zoskupené na základe rozdielov v ich bunkovej stene. Grampozitívne baktérie sú zložené z hrubej peptidoglykánovej vrstvy v ich bunkovej stene, zatiaľ čo gramnegatívne baktérie sú zložené z tenkej peptidoglykánovej vrstvy v ich bunkovej stene. Výsledok gramového zafarbenia bude založený na rozdiele v hrúbke peptidoglykánovej vrstvy bunkovej steny.
Farbenie podľa Gramov sa uskutočňuje pomocou štyroch rôznych reagencií, a to; primárne farbivo, moridlo, odfarbovacie činidlo a protizápalové farbivo. Ako primárne a protizafarbenie sa používajú kryštalická fialová a safranín, zatiaľ čo ako moridlo a odfarbovač sa používajú gramy jódu a 95% alkoholu. Základné kroky farbenia gramov sú nasledujúce;
- Bakteriálny náter sa pripraví na čistom sklíčku, zafixuje sa a ochladí.
- Náter je 1 - 2 minúty zaliaty krištáľovo fialovou farbou.
- Náter sa opláchne pomaly tečúcou vodou z vodovodu, aby sa odstránili prebytočné škvrny.
- Na náter sa aplikuje 1 g gramov jódu.
- Náter sa opláchne pomaly tečúcou vodou z vodovodu
- Náter sa premyje 95% alkoholom po dobu 2 - 5 sekúnd a opláchne sa pomaly tečúcou vodou z vodovodu.
- Škvrny sa 1 minútu zafarbia safranínom
- Náter sa opláchne pomaly tečúcou vodou z vodovodu, vysuší sa a pozoruje sa pod mikroskopom.
Na konci gramového zafarbenia budú gramnegatívne baktérie pozorované v ružovej farbe, zatiaľ čo grampozitívne baktérie budú pozorované vo fialovej farbe.
Obrázok 01: Gram negatívne a gram pozitívne baktérie
O výsledku gramového zafarbenia rozhoduje hrúbka peptidoglykánovej vrstvy v ich bunkovej stene. Počas kroku odfarbovania sa primárne zafarbenie a moridlo ľahko odstránia z gramnegatívnych baktérií a stanú sa bezfarebnými, pretože majú tenkú vrstvu peptidoglykánu. Primárne zafarbenie sa zachováva v grampozitívnych baktériách, pretože majú silnú peptidoglykánovú vrstvu. Počiatočné zafarbenie nebude účinné pre grampozitívne baktérie z dôvodu zadržania primárneho zafarbenia. Gram pozitívne baktérie budú teda viditeľné v primárnej farbe škvŕn, to znamená vo fialovej farbe. Počiatočné zafarbenie zafarbí gramnegatívne baktérie a budú viditeľné v základnej farbe, čo je farba safranínu. Preto je ľahké rozdeliť baktérie do dvoch skupín podľa gramového zafarbenia a je cenné pri diferenciácii a identifikácii baktérií.
Čo je kyselina rýchla?
Stálosť v kyselinách je fyzikálnou vlastnosťou určitých baktérií, najmä ich odolnosťou proti odfarbeniu kyselinami počas farbenia. Po zafarbení tieto organizmy odolávajú zriedeným kyslým a / alebo etanolovým odfarbovacím postupom, ktoré sú bežné v mnohých protokoloch o farbení. Týmto organizmom sa teda dáva názov „acidobasný“. Táto vlastnosť sa preukazuje vďaka vysokej hladine voskovitého materiálu (kyselín mykolových) v bunkových stenách. Tento test je rozhodujúci pre identifikáciu Mycobacterium tuberculosis.
Obrázok 2: Kyslé rýchle mykobaktérie
Túto kyslú rýchlu škvrnu vyvinul Paul Ehrlich v roku 1882. Ehrlichovu kyslú rýchlu techniku upravil Ziehl-Neelsen a v súčasnosti sa používa častejšie. Postup rýchleho zafarbenia kyselinou zahŕňa tri rôzne činidlá. Ako primárne zafarbenie sa používa Carbol fuschin. Ako odfarbovacie činidlo sa používa kyslý alkohol. Ako protifarbenie sa používa metylénová modrá. Postup farbenia sa vykonáva nasledujúcim spôsobom.
- Na zafixovanú vzorku na podložnom sklíčku sa nanesie primárne farbivo (karbol fuchsín) (všetky bunky sa zafarbia červenou farbou).
- Sklíčko sa zahrieva parou po dobu 5 minút, čím sa škvrny správne vtlačia do buniek.
- Potom sa pridá odfarbovací roztok (Týmto sa odstráni červené farbivo zo všetkých buniek okrem acidorezistentných baktérií).
- Ako protizafarbenie sa pridá metylénová modrá (farbí všetky odfarbené bakteriálne bunky).
- Kyselé rýchle baktérie zostávajú červené, zatiaľ čo nekyslé rýchle baktérie sa farbia modrou farbou.
Aké sú podobnosti medzi Gram Stain a Acid Fast?
- Gramové farbenie a Acid fast sú dve rôzne techniky farbenia.
- Obidve techniky kategorizujú baktérie do dvoch skupín.
- Obidve techniky používajú dve škvrny a jednu odfarbenie.
Aký je rozdiel medzi Gram Stain a Acid Fast?
Rozdielny článok v strede pred tabuľkou
Gram Stain vs Acid Fast |
|
| Gramovo farbenie je technika diferenciálneho farbenia, ktorá rozdeľuje baktérie na dve skupiny, grampozitívne a gramnegatívne. | Acid Fast stain je rozdielne farbivo používané na identifikáciu acidorezistentných organizmov od nekyslých rýchlych organizmov. |
| Primárna škvrna | |
| Kryštálová fialová je bežne používané primárne farbenie pri gramovom farbení. | Karbol fuchsín je primárne farbivo používané v kyseline. |
| Odfarbovacie činidlo | |
| Ako odfarbovacie činidlo sa pri gramovom farbení používa 95% alkohol. | Kyslý alkohol sa používa ako odfarbovacie činidlo v kyslom prostredí. |
| Counter Stain | |
| Gramová škvrna používa ako kontraindikáciu safranín. | Kyselinové rýchle morenie používa ako protifarbenie metylénovú modrú. |
| Pozorovanie | |
| Gramnegatívne baktérie sú pozorované vo farbe a grampozitívne baktérie sú pozorované vo fialovej farbe. | Kyslé rýchle baktérie sú pozorované v červenej farbe a nekyslé rýchle baktérie sú pozorované v modrej farbe. |
Zhrnutie - Gram Stain vs Acid Fast
Vizualizácia mikroorganizmov v živom stave je zložitá. Preto sa na štúdium ich vlastností intenzívne používajú biologické škvrny a postupy farbenia. Diferenciálne farbenie je jedným typom farbiacej techniky používanej na odlíšenie baktérií. Gramové farbenie a kyslé rýchle farbenie sú dve rôzne techniky farbenia. Gramové farbenie rozlišuje gramnegatívne baktérie a grampozitívne baktérie na základe hrúbky ich bunkových stien. Kyselinové rýchle farbenie odlišuje kyslé rýchle baktérie od nekyslých rýchlych baktérií na základe obsahu kyseliny mykolovej v bunkovej stene. To je rozdiel medzi acidorezistentným a gramovým zafarbením.
Stiahnite si PDF verziu Gram Stain vs. Acid rýchlo
Môžete si stiahnuť verziu tohto článku vo formáte PDF a použiť ho na offline účely podľa citačnej poznámky. Tu si stiahnite verziu PDF. Rozdiel medzi Gram Stain a Acid Fast.
