Kľúčový rozdiel - Gram Stain proti kultúre
Gramovo farbenie je technika farbenia, ktorá sa vykonáva na rozlíšenie baktérií do dvoch skupín podľa hrúbky peptidoglykánovej vrstvy v ich bunkovej stene. Kultúra je metóda pestovania a udržiavania mikroorganizmov v laboratórnych podmienkach na rôzne analýzy. Kľúčovým rozdielom medzi gramovou škvrnou a kultúrou je ich funkcia; gram kmeňa technika farbenia baktérií, kde kultivácia je metóda pestovania a udržiavania mikroorganizmov.
OBSAH
1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je Gram Stain
3. Čo je kultúra
4. Porovnanie vedľa seba - Gram Stain oproti kultúre
5. Zhrnutie
Čo je Gram Stain?
Gramovo farbenie je dôležitá technika diferenciálneho farbenia používaná na bakteriálnu identifikáciu v mikrobiológii. Túto techniku zaviedol dánsky bakteriológ Hans Christian Gram v roku 1884. Gramové farbenie kategorizuje baktérie do dvoch hlavných skupín: grampozitívne a gramnegatívne; sú veľmi dôležité pri klasifikácii a identifikácii baktérií. Gramové farbenie sa uskutočňuje ako počiatočný krok pre bakteriálnu charakterizáciu.
Baktérie sú zoskupené na základe rozdielov v ich bunkovej stene. Grampozitívne baktérie obsahujú vo svojej bunkovej stene silnú vrstvu peptidoglykánu, zatiaľ čo gramnegatívne baktérie obsahujú vo svojej bunkovej stene tenkú vrstvu peptidoglykánu, ako je to znázornené na obrázku 01. Výsledok gramofarbenia bude založený na rozdiele hrúbok v peptidoglykánovej vrstve bunková stena.
Obrázok 1: Grampozitívne baktérie a gramnegatívne baktérie
Farbenie podľa Gramov sa uskutočňuje pomocou štyroch rôznych reagencií, a to; primárne farbivo, moridlo, odfarbovacie činidlo a protizápalové farbivo. Kryštalická fialová a safranín slúžia ako primárne a protizafarbovacie škvrny, zatiaľ čo gramy jódu a 95% alkoholu slúžia ako moridlo a odfarbovač.
Základné kroky farbenia gramov
- Bakteriálny náter sa pripraví na čistom sklíčku, zafixuje sa a ochladí.
- Náter je 1 - 2 minúty zaliaty krištáľovo fialovou farbou.
- Náter sa opláchne pomaly tečúcou vodou z vodovodu, aby sa odstránili prebytočné škvrny.
- Na náter sa aplikuje 1 g gramov jódu.
- Náter sa opláchne pomaly tečúcou vodou z vodovodu
- Náter sa premyje 95% alkoholom po dobu 2 - 5 sekúnd a opláchne sa pomaly tečúcou vodou z vodovodu.
- Škvrny sa 1 minútu zafarbia safranínom
- Náter sa opláchne pomaly tečúcou vodou z vodovodu, vysuší sa a pozoruje sa pod mikroskopom.
Na konci gramového zafarbenia budú gramnegatívne baktérie pozorované v ružovej farbe, zatiaľ čo grampozitívne baktérie budú pozorované vo fialovej farbe, ako je to znázornené na obrázku 02. O výsledku gramového zafarbenia rozhoduje hrúbka peptidoglykánovej vrstvy v ich bunková stena. Počas kroku odfarbovania sa primárne zafarbenie a moridlo ľahko odstránia z gramnegatívnych baktérií a stanú sa bezfarebnými, pretože majú tenkú vrstvu peptidoglykánu. Primárne zafarbenie sa zachováva v grampozitívnych baktériách, pretože majú silnú peptidoglykánovú vrstvu. Počítadlo škvŕn nebude účinné pre grampozitívne baktérie z dôvodu zadržania primárneho škvrny. Takže grampozitívne baktérie budú viditeľné v primárnej farbe škvŕn, tj vo fialovej farbe. Počiatočné zafarbenie zafarbí gramnegatívne baktérie a bude viditeľné v základnej farbe, ktorá je farbou safranín. Preto je ľahké rozdeliť baktérie do dvoch skupín podľa gramového farbenia a je cenné pri diferenciácii a identifikácii baktérií.
Obrázok 2: Gramov kmeň
Čo je to kultúra?
Mikrobiálna kultúra je metóda kultivácie a udržiavania mikroorganizmov v laboratórnych podmienkach na rôzne účely. Kultúry sa pestujú v pevnom, polotuhom a kvapalnom prostredí na základe typu a účelu kultivácie mikroorganizmov. Kultúry dostávajú potrebné živiny a rastové podmienky požadované mikroorganizmami. Existujú rôzne zložky kultivačného média, ako napríklad zdroj energie, zdroj uhlíka, zdroj dusíka, minerály, mikroživiny, voda, tuhnúce činidlo atď. Optimálna teplota, kyslík a pH by sa mali upravovať podľa typu pestovaného mikroorganizmu.
Existujú rôzne typy mikrobiálnych kultúr; napríklad vsádzková kultúra, kontinuálna kultúra, bodná kultúra, kultivácia na agarovej platni, kultivácia vo vývare atď. Podľa zloženia rastového média existujú rôzne typy kultivačných médií známych ako syntetické médiá, polosyntetické médiá a prírodné médiá. Mikrobiálne kultúry sa pripravujú za sterilných podmienok vo vnútri špeciálnej komory nazývanej laminárne prúdenie vzduchu. Rastové médium a sklenený riad sa sterilizujú pred naočkovaním požadovaného mikroorganizmu. Za správnych sterilných podmienok sa cieľový mikroorganizmus prenesie do sterilizovaného živného média a inkubuje sa pri optimálnej teplote. Vo vnútri média bude mikroorganizmus rásť a množiť sa pomocou poskytnutých živín.
Obrázok 3: Bakteriálna kultúra na platni
Aký je rozdiel medzi Gram Stain a Culture?
Rozdielny článok v strede pred tabuľkou
Gram Stain proti kultúre |
|
| Gramov kmeň je technika diferenciálneho farbenia používaná na bakteriálnu diferenciáciu a identifikáciu. | Mikrobiálna kultúra je metóda pestovania mikroorganizmov v laboratóriu. |
| Komponenty | |
| Na to sa používajú rôzne reagencie vrátane dvoch škvŕn. | Toto používa rôzne kultivačné médiá, ako sú pevné, polotuhé a tekuté médiá zložené z živín a ďalších potrebných podmienok. |
| Základné funkcie | |
| To umožňuje zoskupenie baktérií do dvoch skupín: gram negatívne a gram pozitívne. | To umožňuje množenie mikroorganizmov na rôzne účely. |
| Základňa | |
| Výsledok Gramovho farbenia je založený na rozdieloch v peptidoglykánovej vrstve bunkovej steny. | Mikroorganizmy budú rásť a množiť sa vo vnútri kultivačného média. |
| Výsledok | |
| Gram negatívne baktérie sú viditeľné v ružovej farbe a gram pozitívne baktérie sú viditeľné vo fialovej farbe. | Na doskách možno vidieť kolónie mikroorganizmov. Na tekutých médiách sú mikroorganizmy v suspendovanej forme. |
Zhrnutie - Gram Stain proti kultúre
Mikrobiálne kultúry sa pripravujú a udržiavajú v laboratórnych podmienkach na rôzne účely, ako je skladovanie, testovanie, chemické čistenie atď. Gramovo farbenie je postup farbenia, ktorý rozlišuje baktérie na dve hlavné skupiny, ktoré sa nazývajú gramnegatívne baktérie a grampozitívne baktérie. Preto je rozdiel medzi gramovým zafarbením a kultúrou ten, že gramové zafarbenie je technikou farbenia baktérií, zatiaľ čo kultivácia je metódou pestovania a udržiavania mikroorganizmov v laboratóriách.
