Kľúčový rozdiel - horizontálna vs vertikálna gélová elektroforéza
Gélová elektroforéza je laboratórna technika používaná v genetike na separáciu zmesí obsahujúcich DNA, RNA a ďalšie proteíny podľa ich príslušného náboja a molekulárnej veľkosti. DNA, RNA alebo proteíny, ktoré je potrebné pri tejto metóde oddeliť, sa prevedú gélom, ktorý obsahuje malé póry. Molekuly sú poháňané gélom pomocou elektrického poľa. Molekuly prechádzajú cez póry gélu a rýchlosť pohybu je nepriamo úmerná ich príslušnej dĺžke. Preto sa molekuly s nižšou molekulovou veľkosťou budú pohybovať rýchlejšie ako molekuly s vyššou molekulovou hmotnosťou. Elektrické pole je generované rozdielom v náboji na dvoch koncoch gélu. Jeden koniec obsahuje kladný náboj a druhý koniec záporný náboj. Pretože molekuly DNA a RNA sú negatívne nabité,budú priťahované smerom k kladne nabitému koncu gélu. Gélová elektroforéza môže byť z dvoch rôznych spôsobov: horizontálna gélová elektroforéza a vertikálna gélová elektroforéza. Pri horizontálnej gélovej elektroforéze je gél prítomný v horizontálnej orientácii a je ponorený do kontinuálneho tlmivého roztoku, ktorý je prítomný vo vnútri samotného gélového boxu. Pri vertikálnej gélovej elektroforéze je tlmivý systém orientovaný vertikálne a je diskontinuálny s dvoma komorami prítomnými na hornej a spodnej časti s katódou, respektíve anódou. Toto je kľúčový rozdiel medzi horizontálnou a vertikálnou gélovou elektroforézou.gél je prítomný v horizontálnej orientácii a je ponorený do kontinuálneho tlmivého roztoku, ktorý je prítomný vo vnútri samotného gélového boxu. Pri vertikálnej gélovej elektroforéze je tlmivý systém orientovaný vertikálne a je diskontinuálny s dvoma komorami prítomnými na hornej a spodnej časti s katódou, respektíve anódou. Toto je kľúčový rozdiel medzi horizontálnou a vertikálnou gélovou elektroforézou.gél je prítomný v horizontálnej orientácii a je ponorený do kontinuálneho tlmivého roztoku, ktorý je prítomný vo vnútri samotného gélového boxu. Pri vertikálnej gélovej elektroforéze je tlmivý systém orientovaný vertikálne a je diskontinuálny s dvoma komorami prítomnými na hornej a spodnej časti s katódou, respektíve anódou. Toto je kľúčový rozdiel medzi horizontálnou a vertikálnou gélovou elektroforézou.
OBSAH
1. Prehľad a hlavný rozdiel
2. Čo je to horizontálna gélová elektroforéza
3. Čo je to vertikálna gélová elektroforéza
4. Podobnosti medzi horizontálnou a vertikálnou gélovou elektroforézou
5. Porovnanie vedľa seba - horizontálna vs vertikálna gélová elektroforéza v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie
Čo je to horizontálna gélová elektroforéza?
Horizontálna gélová elektroforéza využíva základnú teóriu na separáciu molekúl DNA, RNA alebo proteínov podľa ich príslušnej veľkosti a náboja. Pri tejto technike je gél prítomný v horizontálnej orientácii a je ponorený do kontinuálneho tlmivého roztoku. Agarózový gél sa používa na rozdelenie gélového boxu na dva oddelenia. Jeden koniec gélového boxu obsahuje anódu, zatiaľ čo druhý koniec obsahuje katódu. Keď je aplikovaný prúd, vyrovnávacia pamäť použitá v tejto technike umožňuje vytvorenie gradientu náboja. Po nanesení náboja má gél tendenciu sa zahrievať. Nárazník funguje aj ako chladiaca kvapalina, ktorá udržuje teplotu na optimálnej úrovni. Recirkulácia bežiaceho tlmivého roztoku zabráni vytvoreniu gradientu pH. Diskontinuálny tlmivý systém nie je možné použiť pri horizontálnej gélovej elektroforéze, pretože dva oddiely gélového systému sú spojené s bežným tlmivým roztokom. Akrylamid sa používa počas gélovej elektroforézy na separáciu proteínových zmesí.
Obrázok 01: Horizontálna gélová elektroforéza
Pri horizontálnej gélovej elektroforéze nie je možné použiť akrylamid, pretože gélový box je vystavený kyslíku. V dôsledku prítomnosti kyslíka je inhibovaná polymerizácia akrylamidu, čo narúša tvorbu gélu. Horizontálna gélová elektroforéza je ľahká metóda, ktorá sa využíva pri separácii DNA a RNA.
Čo je to vertikálna gélová elektroforéza?
Technika vertikálnej gélovej elektroforézy funguje podľa primárnej teórie gélovej elektroforézy, ale považuje sa za zložitejšiu ako metóda horizontálnej gélovej elektroforézy. Táto technika využíva diskontinuálny buffer. Katóda je umiestnená v hornej komore a anóda je umiestnená v spodnej komore. Elektródy prítomné v každom oddelení poskytujú požadované elektrické pole. Medzi dve namontované sklenené platne sa naleje tenká vrstva gélu. Preto je horná časť gélu ponorená v hornej komore a spodná časť gélu je ponorená v komore dole. Akonáhle je aplikovaný prúd, malá časť tlmivého roztoku sa presunie do spodnej komory z hornej komory cez gél. Prúd aplikovaný v tejto technike je v minútových jednotkách.
Obrázok 02: Vertikálna gélová elektroforéza
Pri vertikálnej gélovej elektroforéze pufr preteká iba cez gél. To umožňuje presnú kontrolu gradientu napätia počas fázy separácie. Môže sa použiť akrylamidový gél, pretože komory nie sú vystavené vzdušnému kyslíku. Vzhľadom na menšiu veľkosť pórov akrylamidového gélu je možné dosiahnuť presnú separáciu s vyšším rozlíšením.
Aké sú podobnosti medzi horizontálnou a vertikálnou gélovou elektroforézou?
- Oba systémy fungujú podľa základnej teórie gélovej elektroforézy.
- Anóda a katóda sa používajú na zabezpečenie požadovaného elektrického poľa v oboch systémoch.
Aký je rozdiel medzi horizontálnou a vertikálnou gélovou elektroforézou?
Rozdielny článok v strede pred tabuľkou
Horizontálna vs vertikálna gélová elektroforéza |
|
| Horizontálna gélová elektroforéza je technika gélovej elektroforézy, pri ktorej je gél prítomný v horizontálnej orientácii. | Vertikálna gélová elektroforéza je technika gélovej elektroforézy, pri ktorej je gél orientovaný vertikálne. |
| Nárazník | |
| Horizontálna gélová elektroforéza pozostáva z kontinuálneho pufra. | Prevádzkový pufor je diskontinuálny pri vertikálnej gélovej elektroforéze. |
| Použitie akrylamidu | |
| Akrylamid nie je možné použiť na horizontálnu gélovú elektroforézu, pretože gélový box je vystavený vzdušnému kyslíku. | Pretože gél nie je vystavený vzdušnému kyslíku v dôsledku dvoch samostatných komôr, môže sa na vertikálnu gélovú elektroforézu použiť akrylamid. |
| Funkcia | |
| Horizontálna gélová elektroforéza sa častejšie používa na separáciu zmesí DNA a RNA, ale nie proteínov. | Na separáciu zmesí proteínov sa používa vertikálna gélová elektroforéza. |
Zhrnutie - horizontálna vs vertikálna gélová elektroforéza
Gélová elektroforéza je laboratórna technika, ktorá sa široko používa pri separácii zmesí obsahujúcich molekuly DNA, RNA a bielkovín. Existujú dve metódy gélovej elektroforézy: horizontálna a vertikálna gélová elektroforéza. Pri horizontálnej gélovej elektroforéze je bežiaci tlmivý roztok kontinuálny, zatiaľ čo pri vertikálnej gélovej elektroforéze je diskontinuálny. To je rozdiel medzi horizontálnou a vertikálnou gélovou elektroforézou. Oba systémy fungujú podľa spoločného princípu gélovej elektroforézy.
Stiahnite si PDF verziu horizontálnej a vertikálnej gélovej elektroforézy
Môžete si stiahnuť verziu tohto článku vo formáte PDF a použiť ho na offline účely podľa citačnej poznámky. Tu si stiahnite verziu PDF. Rozdiel medzi horizontálnou a vertikálnou gélovou elektroforézou.
