Kľúčový rozdiel - stránka SDS vs Western Blot
Western blot je technika, ktorá detekuje špecifický proteín zo vzorky proteínu. Táto technika sa uskutočňuje pomocou niekoľkých kľúčových krokov: gélová elektroforéza, blotovanie a hybridizácia. Gélová elektroforéza s dodecylsulfátom sodným na polyakrylamide (SDS Page) je druh techniky gélovej elektroforézy, ktorá sa používa na separáciu proteínov podľa ich veľkostí (molekulových hmotností). Western blot je špeciálna vrstva blotovacej membrány, ktorá sa používa na prenos rovnakého vzoru proteínov na stránke SDS. Kľúčovým rozdielom medzi SDS Page a Western blotom je to, že SDS Page umožňuje separáciu proteínov v zmesi, zatiaľ čo Western blot umožňuje detekciu a kvantifikáciu špecifického proteínu zo zmesi. Obidve sú užitočné pri štúdiách analýzy proteínov.
OBSAH
1. Prehľad a hlavný rozdiel
2. Čo je stránka SDS
3. Čo je Western Blot
4. Porovnanie vedľa seba - stránka SDS vs Western Blot
5. Zhrnutie
Čo je stránka SDS?
SDS Page je technika gélovej elektroforézy používaná na separáciu proteínov. Bežne sa používa v biochémii, genetike, súdnom lekárstve a molekulárnej biológii. Akonáhle sú proteíny extrahované zo vzorky, sú nanesené na gél vyrobený z SDS a polyakrylamidu. SDS je aniónový detergent, ktorý sa používa na linearizáciu proteínov (denaturované proteíny) a na dodanie linearizovaných proteínov negatívny náboj úmerný ich molekulovej hmotnosti. Polyakrylamid sa stáva pevnou podložkou pre gél. Denaturované proteíny, ktoré sú negatívne nabité, migrujú cez gél k pozitívnemu koncu prístroja. Podľa veľkostí proteínov sa migračné rýchlosti líšia medzi proteínmi a dochádza k separácii. Stránka SDS je preto užitočná na separáciu jednotlivých proteínov na základe ich veľkostí.
Príprava polyakrylamidového gélu na frakcionáciu proteínov je zásadným krokom v SDS. Správna koncentrácia polyakrylamidu a typ použitého sieťovacieho činidla silne ovplyvňujú fyzikálne vlastnosti gélu, čo vedie k skutočnej separácii rôznych proteínov. Veľkosti pórov gélu by sa mali správne riadiť, aby sa dosiahlo účinné oddelenie. SDS Page sa však považuje za techniku separácie proteínov s vysokým rozlíšením.
Technika stránky SDS má veľké obmedzenie v analýze proteínov. Pretože SDS denaturuje proteíny pred separáciou, neumožňuje detekciu enzymatickej aktivity, väzbových interakcií proteínov, proteínových kofaktorov atď.
Obrázok 01: Strana KBÚ
Čo je Western Blot?
Technika Western blot umožňuje detekciu špecifického proteínu z proteínovej zmesi a meranie množstva a molekulovej hmotnosti proteínu. Western blot je membrána použitá počas procesu blotovania na získanie zrkadlového obrazu proteínových vzorcov v SDS-polyakrylamidovom géli. Membrána, ktorá sa používa na Western blot, je väčšinou vyrobená z nitrocelulózy alebo polyvinylidéndifluoridu (PVDF). Membrána s preneseným proteínom sa môže použiť na identifikáciu požadovaného proteínu. Vyžaduje vysoko kvalitnú protilátku na detekciu požadovaného proteínu hybridizáciou. Protilátka sa viaže na svoj špecifický antigén a odhaľuje prítomnosť požadovaného antigénu, ktorým je proteín.
Prenos proteínov z SDS polyakrylamidového gélu na Western blot sa uskutočňuje elektroblotom. Je to efektívna a rýchla metóda, ktorá spôsobuje, že proteíny elektroforézujú z gélu a prechádzajú na nitrocelulózovú membránu (western blot).
Obrázok 02: Western blot
Aký je rozdiel medzi SDS Page a Western Blot?
Rozdielny článok v strede pred tabuľkou
Stránka SDS vs Western Blot |
|
| SDS Page je technika gélovej elektroforézy. | Western blot je technika, ktorá sa vykonáva na membráne na detekciu špecifického proteínu zo zmesi. |
| Použite | |
| Stránka SDS umožňuje separáciu proteínov podľa ich veľkostí. | Western blot umožňuje prenos proteínov na géli SDS page bez zmeny jeho vzoru a umožňuje hybridizáciu so špecifickými protilátkami. |
| Nevýhody | |
| Nevýhodou tejto techniky je denaturácia proteínov, vysoká cena a prítomnosť neurotoxínových chemikálií. | Táto technika je časovo náročná a vyžaduje si dobre vyskúšané osobné a špecifické kontrolované podmienky. |
Zhrnutie - stránka SDS vs Western Blot
Stránka SDS a Western blot sú dve metódy zahrnuté do analýzy proteínov. Stránka SDS umožňuje ľahkú separáciu proteínov na géli podľa ich molekulovej hmotnosti. Western blot pomáha potvrdiť prítomnosť a množstvo špecifického proteínu hybridizáciou so špecifickými protilátkami. To je rozdiel medzi SDS Page a western blot.
