Kľúčový rozdiel - vektory YAC vs BAC
Vektory sa používajú pri molekulárnom klonovaní. Vektor možno definovať ako molekulu DNA, ktorá sa správa ako vehikulum na prenos cudzieho genetického materiálu do inej bunky. Vektor obsahujúci cudziu DNA je známy ako rekombinantná DNA a mal by mať schopnosť replikovať sa a exprimovať ho v hostiteľskom organizme. Kvasinkový umelý chromozóm (YAC) a bakteriálny umelý chromozóm (BAC) sú dva typy vektorov zapojených do klonovania. Kľúčovým rozdielom medzi YAC a BAC je, že YAC je umelo skonštruovaný vektorový systém využívajúci špecifickú oblasť kvasinkových chromozómov na vloženie veľkých segmentov genetického materiálu do kvasinkových buniek, zatiaľ čo BAC je umelo konštruovaný vektorový systém používajúci špecifickú oblasť chromozómu E. coli vložiť veľké segmenty DNA do buniek E. coli.
OBSAH
1. Prehľad a hlavný rozdiel
2. Čo sú vektory YAC
3. Čo sú vektory BAC
4. Porovnanie vedľa seba - vektory YAC vs BAC
5. Zhrnutie
Čo sú vektory YAC?
YAC (kvasinkový umelý chromozóm) je umelo vyrobený chromozóm, ktorý je schopný niesť veľký segment cudzej DNA a replikovať sa v kvasinkových bunkách. Má centroméru, teloméry, ako aj autonómne sa replikujúce sekvencie, ktoré sú nevyhnutné pre replikáciu a stabilitu. YAC by tiež mal niesť selektívny marker alebo markery a reštrikčné miesta, aby sa stal efektívnym klonovacím vektorom. Do YAC možno vložiť veľkú sekvenciu v rozmedzí od 1 000 kb do 2 000 kb a preniesť ju do kvasiniek. Účinnosť transformácie YAC je veľmi nízka.
Obrázok 01: Vektor YAC
Čo sú BAC vektory?
Bakteriálny umelý chromozóm (BAC) je umelo vyrobený chromozóm na molekulárne klonovanie. Má špecifické oblasti F plazmidu E. coli a je kruhový a super vinutý. BAC je vyvinutý na klonovanie fragmentov DNA do baktérií, najmä do E. coli. Môže niesť fragmenty DNA s veľkosťou do 300 kb. V porovnaní s YAC sú klonovacie vložky BAC menších rozmerov. BAC boli vyvinuté v roku 1992 a dodnes sú populárne vďaka svojej stabilite a ľahkej konštrukcii. BAC sú tiež užitočné pri vývoji vakcín.
Obrázok 02: BAC vektor v molekulárnom klonovaní
Aký je rozdiel medzi vektormi YAC a BAC?
Rozdielny článok v strede pred tabuľkou
Vektory YAC vs BAC |
|
| YAC je geneticky upravený chromozóm s použitím kvasinkovej DNA na účely klonovania. | BAC je geneticky upravená molekula DNA, ktorá na účely klonovania využíva DNA E. coli. |
| rod | |
| YAC boli navrhnuté na klonovanie veľkých fragmentov genómovej DNA do kvasiniek. | BAC boli vyvinuté na klonovanie veľkých genómových fragmentov do Escherichia coli. |
| Vložte dĺžku | |
| YAC môžu obsahovať genomové vložky veľkosti megabázy (1 000 kb - 2 000 kb). | BAC môžu niesť vložky s veľkosťou 200–300 kb alebo menej. |
| Konštrukcia | |
| YAC DNA je ťažké intaktne purifikovať a vyžaduje vysokú koncentráciu na vytvorenie vektorového systému YAC. | BAC sa ľahko čistí neporušený a dá sa ľahko pripraviť. |
| Chimerizmus | |
| YAC sú často chimérické. | BAC sú zriedka chimérické. |
| Stabilita | |
| YAC je nestabilný. | BAC je stabilný. |
| Úpravy | |
| Rekombinácia kvasiniek je veľmi možná a vždy zostáva aktívna. Preto môže v YAC generovať delécie a ďalšie preskupenia. | Je zabránené rekombinácii E. coli a je v prípade potreby zapnutá. Znižuje teda nežiaduce preusporiadania v BAC. |
| Údržba | |
| Manipulácia s rekombinantnými YAC zvyčajne vyžaduje prenos YAC do E. coli pre následnú manipuláciu. Preto je to namáhavý proces. | Modifikácia BAC sa vyskytuje priamo v E. coli. Nie je teda potrebný prenos DNA. Tento proces preto nie je namáhavý. |
Zhrnutie - vektory YAC vs BAC
YAC sa stal základným výskumným nástrojom v klonovacích procesoch vďaka svojej schopnosti klonovať veľké fragmenty DNA do hostiteľského organizmu. Avšak YAC majú niekoľko nevýhod ako vektory, ako sú konštrukčné ťažkosti, chimérizmus, nestabilita atď. Preto vedci vyvinuli vektory BAC na prekonanie týchto problémov. BAC sa skonštruoval pomocou špecifických oblastí chromozómu E. coli. Je to stabilný vektor a dá sa ľahko zostrojiť. Avšak dĺžka DNA, ktorú dokáže BAC zvládnuť, je až 20-krát kratšia ako dĺžka YAC. To je rozdiel medzi vektorovými systémami YAC a BAC. V súčasnosti je v laboratóriách BAC preferovanejší ako YAC.
