Kľúčový rozdiel - stohovací gél vs oddeľovací gél
Pojmy stohovací gél a separačný gél sa používajú na vysvetlenie techniky SDS-PAGE. SDS-PAGE alebo elektroforéza na géle dodecylsulfát-polyakrylamid sodný je laboratórna technika, ktorá sa používa na separáciu molekúl proteínov na základe ich molekulových hmotností. Teória, ktorá stojí za touto technikou, spočíva v tom, že proteíny s rôznymi molekulovými hmotnosťami vykazujú rôzne rýchlosti migrácie; molekuly s nízkou molekulovou hmotnosťou migrujú rýchlejšie, zatiaľ čo molekuly s vysokou molekulovou hmotnosťou migrujú pomaly. Migračným médiom je gél. Existujú dva typy gélov, ktoré sa nazývajú stohovací a separačný. Kľúčový rozdiel medzi stohovacím gélom a separačným gélom je ten, že pH stohovacieho gélu je 6,8, zatiaľ čo pH separačného gélu je 8,8.
OBSAH
1. Prehľad a hlavný rozdiel
2. Čo je stohovací gél
3. Čo je separačný gél
4. Vzťah medzi stohovacím gélom a separačným gélom
5. Porovnanie vedľa seba - stohovací gél vs separačný gél v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie
Čo je stohovací gél?
Stohovací gél je nízko koncentrovaný polyakrylamidový gél, ktorý sa umiestni na vrch koncentrovanejšieho štiepiaceho gélu (separačný gél) technikou SDS-PAGE. Stohovací gél sa používa na zlepšenie rozlíšenia elektroforézy. Rozlíšenie sa zvyšuje z dôvodu rozdielu medzi koncentráciami stohovacieho gélu a rozlišovacieho gélu, ktoré majú vplyv na proteíny vo vzorke. Pretože koncentrácia polyakrylamidu v stohovacom géle je nízka, veľkosť pórov je vyššia. To tiež pomáha pri zvyšovaní separácie.
Stohovací gél je sypký polyakrylamidový gél s veľkými pórmi asi 7% polyakrylamidu. Tieto póry nepôsobia ako významná bariéra pre veľké molekuly bielkovín. Preto tento gél mierne ovplyvňuje mobilitu týchto proteínov. Toto umožňuje separáciu podľa mobility a veľkosti proteínu ich koncentráciou medzi dvoma gélmi.
Obrázok 01: SDS-PAGE akrylamidový gél
PH stohovacieho gélu je 6,8. Jeho pH je kyslé ako pH štiepenia gélu o 2 jednotky pH. Toto pH znamená nižšiu iónovú silu, a teda vyšší elektrický odpor. To vyvoláva mobilitu proteínov ako iné nabité častice prítomné v géle.
Čo je separačný gél?
Separačný gél alebo štiepiaci gél technológie SDS-PAGE je vysoko koncentrovaný polyakrylamidový gél, ktorý sa umiestňuje na vrchnú časť nízko koncentrovaného stohovacieho gélu. Separačný gél obsahuje vysoké množstvo polyakrylamidu (10%). Hodnota pH tohto gélu sa udržuje na hodnote 8,8, čo je vyššia hodnota pH ako v prípade stohovacieho gélu.
Obrázok 02: Prístroj na gélovú elektroforézu
Keď sa molekuly proteínu dostanú do separačného gélu, migrácia týchto molekúl sa spomalí, pretože separačným gélom je vysoko koncentrovaný gél s malou veľkosťou pórov, ktorý môže pôsobiť ako značná bariéra pre pohyb molekúl proteínu. Toto spomalenie umožňuje ostatným proteínom pomaly migrovať, aby stihli vzniknúť, čo vedie k úzkemu koncentrovanému pásu medzi dvoma gélmi.
Aký je vzťah medzi stohovacím gélom a separačným gélom?
V rovnakom prístroji sa používajú typy stohovacieho gélu aj separačného gélu
Aký je rozdiel medzi stohovacím gélom a separačným gélom?
Rozdielny článok v strede pred tabuľkou
Skladací gél vs separačný gél |
|
| Stohovací gél je nízko koncentrovaný polyakrylamidový gél, ktorý sa umiestni na vrch koncentrovanejšieho štiepiaceho gélu (separačný gél) technikou SDS-PAGE. | Separačným gélom alebo štiepiacim gélom technikou SDS-PAGE je vysoko koncentrovaný polyakrylamidový gél, ktorý je umiestnený na vrchu nízko koncentrovaného stohovacieho gélu. |
| Umiestnenie | |
| Na štiepiaci (separačný) gél sa umiestni stohovací gél. | Separačný gél sa umiestni na dno nádoby použitej na gélovú elektroforézu. |
| Koncentrácia | |
| Koncentrácia stohovacieho gélu je vysoká. | Koncentrácia separačného gélu je nízka. |
| Obsah polyakrylamidu | |
| Stohovací gél obsahuje asi 7% polyakrylamidu. | Separačný gél obsahuje asi 10% polyakrylamidu. |
| pH | |
| PH stohovacieho gélu je 6,8. | PH separačného gélu je 8,8. |
| Veľkosť pórov | |
| V stohovacom géli sú prítomné veľké veľkosti pórov. | V separačnom géle sú prítomné malé veľkosti pórov. |
| Rozhodnutie | |
| Stohovací gél poskytuje lepšie rozlíšenie. | Separačný gél poskytuje zlé rozlíšenie. |
Zhrnutie - stohovací gél vs oddeľovací gél
Stohovací gél a separačný gél sú dva typy polyakrylamidových gélov, ktoré sa používajú na lepšie oddelenie molekúl proteínov v danej vzorke. Rozdiel medzi stohovacím gélom a separačným gélom je ten, že pH stohovacieho gélu je 6,8, zatiaľ čo pH separačného gélu je 8,8.
