Kľúčový rozdiel - priama vs nepriama ELISA
Enzýmový imunotest (ELISA), tiež známy ako enzýmový imunotest, je sérologický test, ktorý detekuje protilátky v krvi. Používa sa ako diagnostický nástroj na zistenie, či bol pacient vystavený konkrétnemu typu vírusu alebo iného infekčného agens (antigén) a či si telo proti infekcii vytvorilo protilátky. ELISA môže tiež identifikovať minulé a súčasné infekcie. Preto sa test ELISA často používa ako test predbežného vyšetrenia lekármi pred hĺbkovou analýzou chorôb. Tento test je možné vykonať v laboratóriu odberom krvi pacientovi. Existujú dva typy testu ELISA: priamy test ELISA a nepriamy test ELISA. Kľúčový rozdiel medzi priamym a nepriamym testom ELISA je v tom, že nepriamy test ELISA je citlivejší a vyžaduje pridanie sekundárnej protilátky, zatiaľ čo priamy test ELISA je menej citlivý a používa iba primárnu protilátku.
OBSAH
1. Prehľad a hlavný rozdiel
2. Čo je priama ELISA
3. Čo je nepriama ELISA
4. Porovnanie vedľa seba - priama vs nepriama ELISA
5. Zhrnutie
Čo je to priama ELISA?
ELISA je diagnostický test na ochorenie, ktorý sa vykonáva na identifikáciu prítomnosti konkrétnych antigénov alebo protilátok v krvi. Robí sa to ako doštičkový test. Používa protilátky spojené s ľahko stanoviteľnými enzýmami. Prítomnosť antigénov vo vzorke séra sa viaže so špecifickými protilátkami spojenými s enzýmami. V poslednom kroku sa pridá špecifický substrát, ktorý reaguje s enzýmom. Enzým premieňa substrát na farebný produkt alebo produkt produkujúci signál. Zmena farby chemického substrátu odhalí prítomnosť konkrétnej protilátky vo vzorke séra. Priamy test ELISA používa iba primárnu protilátku naviazanú na enzým. Po naviazaní na antigén rýchlo mení farbu, čo naznačuje prítomnosť infekčného agens v krvi. Avšakintenzita signálov je pri priamom teste ELISA slabšia, pretože epitopy sú obmedzené na väzbu antigénov. Priama ELISA je preto v porovnaní s nepriamou ELISA menej citlivá.
Obrázok 01: Priamy test ELISA
Čo je nepriama ELISA?
ELISA sa môže uskutočniť pomocou dvoch typov protilátok, a to; primárna protilátka a sekundárna protilátka. Nástroj pre nepriamy test ELISA používa na zosilnenie signálov pre lepšiu detekciu oba typy protilátok. Technika nepriamej ELISA sa vykonáva nasledovne.
- Doštičky sa inkubujú s antigénmi a premyjú, aby sa blokovala nešpecifická väzba.
- Potom sa pridajú primárne protilátky a premyjú sa.
- Pridajú sa sekundárne protilátky spojené s enzýmom a premyjú sa.
- Pridá sa substrát a nechá sa reagovať s enzýmami.
- Zistia sa signály a zistí sa prítomnosť alebo neprítomnosť špecifického antigénu vo vzorke.
V nepriamom teste ELISA sa niekoľko sekundárnych protilátok môže viazať na jednu primárnu protilátku. Sekundárne protilátky sú spojené s ľahko stanoviteľnými enzýmami. Jedna väzba preto môže vytvárať silný signál v dôsledku viac ako jednej interakcie. Nepriama ELISA je teda citlivejšia ako priama ELISA. Nepriama ELISA však môže vytvárať nešpecifické signály v dôsledku krížových reakcií sekundárnych protilátok.
Obrázok 02: Nepriamy test ELISA
Aký je rozdiel medzi priamym a nepriamym testom ELISA?
Rozdielny článok v strede pred tabuľkou
Priama vs nepriama ELISA |
|
| Priama ELISA je v porovnaní s nepriamou ELISA menej citlivá. | Nepriama ELISA je citlivejšia. |
| Čas potrebný | |
| Priamy test ELISA je rýchly proces. | Nepriama ELISA je časovo náročná. |
| Používanie protilátok | |
| Pri priamom teste ELISA sa používa iba jeden typ protilátok (primárne protilátky). | Na nepriamy test ELISA sa používajú primárne a sekundárne protilátky. |
| Prepojiť s enzýmami | |
| Primárne protilátky sú spojené s enzýmami. | Sekundárne protilátky sú spojené s enzýmami. |
| Krížová reaktivita druhých protilátok | |
| Priama ELISA eliminuje krížovú reaktivitu druhých protilátok. | Nepriama ELISA je ovplyvnená krížovou reaktivitou druhých protilátok. |
| Signály | |
| Signály sú v porovnaní s nepriamym testom ELISA slabé. | Signály sú zosilnené v nepriamej ELISA. Preto je ľahké ho zistiť. |
Zhrnutie - priama vs nepriama ELISA
ELISA je biochemická technika používaná hlavne v imunológii na zisťovanie prítomnosti protilátky alebo antigénu vo vzorke krvi pacienta. Môže sa uskutočniť pomocou dvoch procesov známych ako priamy alebo nepriamy test ELISA. Priamy test ELISA používa na detekciu antigénu iba primárne protilátky, zatiaľ čo nepriamy test ELISA používa primárne aj sekundárne protilátky. Pri priamej ELISA sú primárne protilátky značené, zatiaľ čo pri nepriamej ELISA sú značené sekundárne protilátky. To je rozdiel medzi priamym a nepriamym testom ELISA.
