Rozdiel Medzi Hybridizáciou In Situ A Imunohistochémiou

2024 Autor: Mildred Bawerman | [email protected]. Naposledy zmenené: 2023-12-16 08:42

Kľúčový rozdiel - hybridizácia in situ vs. imunohistochémia

Diagnostika rakoviny a infekčných chorôb je populárnym trendom, pri ktorom sa používajú nové techniky založené na proteomike a genomike na účely identifikácie nádorov alebo infekčných buniek, ich množenia a miest vývoja buniek a analýzy genetických základov väčšiny prenosných a neprenosných chorôb. To povedie k presnému spracovaniu a navrhovaniu liekov a k vývoju prispôsobených terapií chorôb. In situ hybridizácia (ISH) a imunohistochémia (IHC) sú dve také široko používané techniky v biológii rakoviny a kľúčový rozdiel medzi hybridizáciou in situ a imunochémiou spočíva v molekulách, ktoré sa používajú pri analytickom postupe. V ISH sa na analýzu používajú sondy nukleových kyselín, zatiaľ čo v IHC sa na diagnostické stanovenie používajú monoklonálne a polyklonálne protilátky.

OBSAH

1. Prehľad a kľúčový rozdiel

2. Čo je hybridizácia in situ

3. Čo je imunohistochémia

4. Podobnosti medzi hybridizáciou in situ a imunohistochémiou

5. Porovnanie vedľa seba - hybridizácia in situ vs imunohistochémia v tabuľkovej forme

6. Zhrnutie

Čo je hybridizácia in situ (ISH)?

Hybridizácia in situ je technika hybridizácie nukleových kyselín, ktorá sa priamo uskutočňuje na časti alebo úseku tkaniva, v celom tkanive alebo v bunkách. Táto technika závisí od teórie komplementárneho párovania báz Watson Crick, ktorej výsledkom sú buď hybridy DNA-DNA alebo hybridy DNA-RNA, ktoré dokážu detegovať mutované gény alebo identifikovať požadovaný požadovaný gén. Ako hybridizačné sondy sa používajú jednovláknové sekvencie DNA, dvojvláknové sekvencie DNA, jednovláknové sekvencie RNA alebo syntetické oligonukleotidové sekvencie a tieto sondy sú označené rádioaktívnym fosforom na svojom 5 'konci na účely identifikačných postupov pri autorádiografii alebo označené fluorescenčnými farbivami.. K dispozícii sú rôzne typy techník ISH na základe typu použitej sondy a typu použitej vizualizačnej techniky.

Obrázok 01: Fluorescenčná hybridizácia in situ

Existuje mnoho aplikácií ISH, hlavne v molekulárnej diagnostike infekčných chorôb na identifikáciu prítomnosti patogénov a na potvrdenie patogénu pomocou molekulárnej diagnostiky. Používa sa tiež v oblasti vývojovej biológie, karyotypizácie a fylogenetickej analýzy a fyzikálneho mapovania chromozómov.

Čo je to imunohistochémia (IHC)?

V technike IHC je hlavnou analyzovanou molekulou antigén. Počas IHC sa používajú monoklonálne a polyklonálne protilátky na stanovenie prítomnosti antigénov po infekcii alebo stave malígnej bunkovej proliferácie. Táto technika je založená na väzbe antigén-protilátka a pre túto techniku sa používajú enzýmové značky; jednou takouto aplikáciou je ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay). Markery môžu byť tiež fluorescenčne označené protilátky alebo rádioaktívne značené protilátky.

Obrázok 02: Imunohistochémia

IHC sa široko používa na detekciu rakovinových buniek. Diagnostické postupy sa zameriavajú na antigény prítomné v nádorových bunkách na identifikáciu a charakterizáciu nádoru. Rovnaký postup je začlenený do diagnostiky infekčných agensov. Monoklonálne a polyklonálne protilátky sa tiež používajú na analýzu rôznych génových produktov umožnením väzbovej reakcie protilátka-antigén medzi požadovaným proteínom a podanou syntetickou protilátkou.

Aké sú podobnosti medzi hybridizáciou in situ a imunohistochémiou?

• ISH a IHC sú veľmi špecifické reakcie.
• Obidve techniky sú veľmi presné.
• Obidve techniky je možné použiť v diagnostike rakoviny a infekčných chorôb.
• Tieto techniky sa vykonávajú v sterilných prostrediach in vitro.
• Obidve sú rýchle techniky, ktoré poskytujú reprodukovateľné výsledky.
• ISH a IHC používajú detekčné metódy, ako je rádioaktívne značenie a fluorescenčné techniky.

Aký je rozdiel medzi hybridizáciou in situ a imunohistochémiou?

Rozdielny článok v strede pred tabuľkou

Hybridizácia in situ vs imunohistochémia
ISH je technika hybridizácie nukleových kyselín, ktorá sa priamo vykonáva na časti alebo úseku tkaniva alebo celom tkanive.	IHC je technika, pri ktorej sa na stanovenie prítomnosti antigénov, ktoré sú špeciálnymi proteínovými markermi umiestnenými na povrchu buniek, používajú monoklonálne a polyklonálne protilátky.
Typ analyzovaných biomolekúl
ISH analyzuje nukleové kyseliny.	IHC analyzuje proteíny-antigény.
Základ biochemickej reakcie
Pri tejto technike sa vyskytuje komplementárne párovanie báz medzi DNA-DNA alebo DNA-RNA.	Interakcie antigén-protilátka sa zúčastňujú imunohistochémie.
Metódy detekcie spojené s enzýmom
Metódy detekcie spojené s enzýmom nemožno v ISH použiť.	V IHC sa môžu použiť detekčné metódy spojené s enzýmom.

Zhrnutie - hybridizácia in situ vs imunohistochémia

Molekulárna diagnostika je rýchla a potvrdzujúca metóda, ktorú je možné použiť na identifikáciu neprenosného ochorenia, ako je rakovina alebo prenosného ochorenia, ako je HIV alebo tuberkulóza, na základe molekulárnych markerov prítomných v bunkách, ktoré vedú k prejavu choroby. Molekulárne markery môžu byť prítomné vo forme exprimovaných proteínov alebo na genetickej úrovni, na základe ktorej sa zavádzajú rôzne nové techniky na zvýšenie účinnosti a sú menej pracné, aj keď s týmito technikami súvisia vysoké náklady. ISH teda závisí od formovania hybridu DNA-DNA alebo DNA-RNA a IHC závisí od špecifických reakcií medzi protilátkou a antigénom. To je rozdiel medzi hybridizáciou in situ.

Stiahnite si PDF verziu hybridizácie in situ vs. imunohistochémie

Môžete si stiahnuť verziu tohto článku vo formáte PDF a použiť ho na offline účely podľa citačnej poznámky. Stiahnite si tu PDF verziu. Rozdiel medzi hybridizáciou in situ a imunohistochémiou.