Kľúčový rozdiel - hybridizácia in situ vs. imunohistochémia
Diagnostika rakoviny a infekčných chorôb je populárnym trendom, pri ktorom sa používajú nové techniky založené na proteomike a genomike na účely identifikácie nádorov alebo infekčných buniek, ich množenia a miest vývoja buniek a analýzy genetických základov väčšiny prenosných a neprenosných chorôb. To povedie k presnému spracovaniu a navrhovaniu liekov a k vývoju prispôsobených terapií chorôb. In situ hybridizácia (ISH) a imunohistochémia (IHC) sú dve také široko používané techniky v biológii rakoviny a kľúčový rozdiel medzi hybridizáciou in situ a imunochémiou spočíva v molekulách, ktoré sa používajú pri analytickom postupe. V ISH sa na analýzu používajú sondy nukleových kyselín, zatiaľ čo v IHC sa na diagnostické stanovenie používajú monoklonálne a polyklonálne protilátky.
OBSAH
1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je hybridizácia in situ
3. Čo je imunohistochémia
4. Podobnosti medzi hybridizáciou in situ a imunohistochémiou
5. Porovnanie vedľa seba - hybridizácia in situ vs imunohistochémia v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie
Čo je hybridizácia in situ (ISH)?
Hybridizácia in situ je technika hybridizácie nukleových kyselín, ktorá sa priamo uskutočňuje na časti alebo úseku tkaniva, v celom tkanive alebo v bunkách. Táto technika závisí od teórie komplementárneho párovania báz Watson Crick, ktorej výsledkom sú buď hybridy DNA-DNA alebo hybridy DNA-RNA, ktoré dokážu detegovať mutované gény alebo identifikovať požadovaný požadovaný gén. Ako hybridizačné sondy sa používajú jednovláknové sekvencie DNA, dvojvláknové sekvencie DNA, jednovláknové sekvencie RNA alebo syntetické oligonukleotidové sekvencie a tieto sondy sú označené rádioaktívnym fosforom na svojom 5 'konci na účely identifikačných postupov pri autorádiografii alebo označené fluorescenčnými farbivami.. K dispozícii sú rôzne typy techník ISH na základe typu použitej sondy a typu použitej vizualizačnej techniky.
Obrázok 01: Fluorescenčná hybridizácia in situ
Existuje mnoho aplikácií ISH, hlavne v molekulárnej diagnostike infekčných chorôb na identifikáciu prítomnosti patogénov a na potvrdenie patogénu pomocou molekulárnej diagnostiky. Používa sa tiež v oblasti vývojovej biológie, karyotypizácie a fylogenetickej analýzy a fyzikálneho mapovania chromozómov.
Čo je to imunohistochémia (IHC)?
V technike IHC je hlavnou analyzovanou molekulou antigén. Počas IHC sa používajú monoklonálne a polyklonálne protilátky na stanovenie prítomnosti antigénov po infekcii alebo stave malígnej bunkovej proliferácie. Táto technika je založená na väzbe antigén-protilátka a pre túto techniku sa používajú enzýmové značky; jednou takouto aplikáciou je ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay). Markery môžu byť tiež fluorescenčne označené protilátky alebo rádioaktívne značené protilátky.
Obrázok 02: Imunohistochémia
IHC sa široko používa na detekciu rakovinových buniek. Diagnostické postupy sa zameriavajú na antigény prítomné v nádorových bunkách na identifikáciu a charakterizáciu nádoru. Rovnaký postup je začlenený do diagnostiky infekčných agensov. Monoklonálne a polyklonálne protilátky sa tiež používajú na analýzu rôznych génových produktov umožnením väzbovej reakcie protilátka-antigén medzi požadovaným proteínom a podanou syntetickou protilátkou.
Aké sú podobnosti medzi hybridizáciou in situ a imunohistochémiou?
- ISH a IHC sú veľmi špecifické reakcie.
- Obidve techniky sú veľmi presné.
- Obidve techniky je možné použiť v diagnostike rakoviny a infekčných chorôb.
- Tieto techniky sa vykonávajú v sterilných prostrediach in vitro.
- Obidve sú rýchle techniky, ktoré poskytujú reprodukovateľné výsledky.
- ISH a IHC používajú detekčné metódy, ako je rádioaktívne značenie a fluorescenčné techniky.
Aký je rozdiel medzi hybridizáciou in situ a imunohistochémiou?
Rozdielny článok v strede pred tabuľkou
Hybridizácia in situ vs imunohistochémia |
|
| ISH je technika hybridizácie nukleových kyselín, ktorá sa priamo vykonáva na časti alebo úseku tkaniva alebo celom tkanive. | IHC je technika, pri ktorej sa na stanovenie prítomnosti antigénov, ktoré sú špeciálnymi proteínovými markermi umiestnenými na povrchu buniek, používajú monoklonálne a polyklonálne protilátky. |
| Typ analyzovaných biomolekúl | |
| ISH analyzuje nukleové kyseliny. | IHC analyzuje proteíny-antigény. |
| Základ biochemickej reakcie | |
| Pri tejto technike sa vyskytuje komplementárne párovanie báz medzi DNA-DNA alebo DNA-RNA. | Interakcie antigén-protilátka sa zúčastňujú imunohistochémie. |
| Metódy detekcie spojené s enzýmom | |
| Metódy detekcie spojené s enzýmom nemožno v ISH použiť. | V IHC sa môžu použiť detekčné metódy spojené s enzýmom. |
Zhrnutie - hybridizácia in situ vs imunohistochémia
Molekulárna diagnostika je rýchla a potvrdzujúca metóda, ktorú je možné použiť na identifikáciu neprenosného ochorenia, ako je rakovina alebo prenosného ochorenia, ako je HIV alebo tuberkulóza, na základe molekulárnych markerov prítomných v bunkách, ktoré vedú k prejavu choroby. Molekulárne markery môžu byť prítomné vo forme exprimovaných proteínov alebo na genetickej úrovni, na základe ktorej sa zavádzajú rôzne nové techniky na zvýšenie účinnosti a sú menej pracné, aj keď s týmito technikami súvisia vysoké náklady. ISH teda závisí od formovania hybridu DNA-DNA alebo DNA-RNA a IHC závisí od špecifických reakcií medzi protilátkou a antigénom. To je rozdiel medzi hybridizáciou in situ.
Stiahnite si PDF verziu hybridizácie in situ vs. imunohistochémie
Môžete si stiahnuť verziu tohto článku vo formáte PDF a použiť ho na offline účely podľa citačnej poznámky. Stiahnite si tu PDF verziu. Rozdiel medzi hybridizáciou in situ a imunohistochémiou.
