Kľúčový rozdiel - imunofluorescencia vs imunohistochémia
Diagnostika chorôb, pri ktorej sa využívajú molekulárne biologické metódy, sa stala objavujúcou sa oblasťou technológie klinických laboratórií. Zahŕňa všetky testy a metódy na identifikáciu choroby a pochopenie jej príčiny analýzou DNA, RNA alebo exprimovaných proteínov v organizme. Prudký pokrok v molekulárnej diagnostike umožnil základný výskum prenosných a neprenosných chorôb. Používajú sa na stanovenie zmien v sekvencii alebo hladinách expresie v rozhodujúcich génoch alebo proteínoch podieľajúcich sa na chorobe. Imunofluorescencia (IF) a imunohistochémia (IHC) sú dve také široko používané techniky v biológii rakoviny. IF je typ IHC, kde sa na analýzu monoklonálnych a polyklonálnych protilátok používa metóda detekcie fluorescencie, zatiaľ čo IHC používa na detekciu monoklonálnych a polyklonálnych protilátok metódy založené na chemických metódach. Toto je kľúčový rozdiel medzi IF a IHC.
OBSAH
1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je to imunofluorescencia
3. Čo je to imunohistochémia
4. Podobnosti medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou
5. Porovnanie vedľa seba - imunofluorescencia vs. imunohistochémia v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie
Čo je to imunofluorescencia (IF)?
Imunofluorescencia je detekčná technika, pri ktorej sú protilátky použité v teste značené pomocou fluorescenčných farbív alebo fluorescenčných proteínov na účely detekcie. Značené sekundárne protilátky môžu mať za následok nežiaduce signály pozadia; preto je IF technika založená na značení samotnej primárnej protilátky v súčasnosti, aby sa zabránilo nežiaducim signálom počas detekcie. Pomocou tejto techniky sa zabráni nešpecifickej väzbe medzi primárnou a sekundárnou protilátkou a je rýchlejšia, pretože nie je zahrnutý žiadny sekundárny inkubačný krok. Zlepšuje sa tiež kvalita údajov.
Obrázok 01: Dvojité imunofluorescenčné farbenie pre BrdU, NeuN a GFAP
Fluorochrómy alebo fluorescenčné farbivá sú zlúčeniny, ktoré môžu absorbovať žiarenie, najlepšie excitované ultrafialové žiarenie. Keď sa častice dostanú z excitovaného stavu do základného stavu, vyžarujú žiarenie, ktoré je zachytené a detekované detektorom a vytvára tak spektrum. Je veľmi dôležité, aby bola fluorescenčná značka kompatibilná a stabilná pre konkrétnu reakciu a mala by byť správne konjugovaná s protilátkou, aby sa dosiahli presné výsledky. Jedným z najpoužívanejších fluórchrómov je fluoresceínizotiokyanát (FITC), ktorý má zelenú farbu, s absorpčnými a emisnými špičkami vlnových dĺžok 490 nm, respektíve 520 nm. Rhodamín, ďalšie činidlo používané pri IF, má červenú farbu a má zreteľné absorpčné a emisné špičkové vlnové dĺžky 553 nm a 627 nm.
Čo je to imunohistochémia (IHC)?
IHC je metóda molekulárneho testovania praktizovaná na identifikáciu a potvrdenie prítomnosti antigénu v cieľovej bunke. Cieľovou bunkou môže byť infekčná častica, mikrobiálny patogén alebo malígna nádorová bunka. IHC využíva monoklonálne a polyklonálne protilátky na stanovenie prítomnosti antigénov prítomných na bunkovom povrchu cieľových buniek. Táto technika je založená na väzbe antigén-protilátka. Na tieto protilátky je konjugovaný detekčný marker, aby sa zistila prítomnosť alebo neprítomnosť konkrétneho antigénu. Tieto markery môžu byť chemické markery, ako sú enzýmy, fluorescenčne označené protilátky alebo rádioaktívne značené protilátky.
Obrázok 02: Rez myšací mozog zafarbený imunohistochémiou
Najpopulárnejšia aplikácia IHC je v biológii rakovinových buniek na identifikáciu prítomnosti malígnych nádorov, ale tiež sa používa na detekciu infekčných chorôb.
Aké sú podobnosti medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou?
- Imunofluorescencia a imunohistochémia sa uskutočňujú za podmienok in vitro.
- Obidve techniky sú založené na antigéne-protilátka
- Obe sú veľmi rýchle techniky.
- Výsledky techník sú reprodukovateľné.
- Oba zlepšili kvalitu údajov.
- Tieto techniky sa používajú v diagnostike rakoviny a infekčných chorôb.
Aký je rozdiel medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou?
Rozdielny článok v strede pred tabuľkou
Imunofluorescencia vs Imunohistochémia |
|
| IF je detekčná technika, pri ktorej sú protilátky použité v teste značené pomocou fluorescenčných farbív alebo fluorescenčných proteínov na detekciu. | IHC je detekčná technika, pri ktorej sú protilátky použité v teste značené pomocou chemických alebo rádioaktívnych prvkov na detekciu. |
| Presnosť | |
| Presnosť je vyššia pri IF technike v porovnaní s IHC. | Presnosť je pri IHC nižšia. |
| Špecifickosť | |
| IF je konkrétnejší. | IHC je menej konkrétny. |
Zhrnutie - Imunofluorescencia vs Imunohistochemistry
Molekulárne mechanizmy priniesli veľa zmien v oblasti medicíny, čo viedlo k vzniku pokrokových metód molekulárneho testovania, ktoré priniesli revolúcie v oblasti diagnostiky. Tieto vynálezy viedli k rýchlej a presnej identifikácii a potvrdeniu choroby, čo umožnilo úspešné podávanie a výrobu liekov. Tieto techniky sa tiež používajú vo farmakológii na nájdenie cieľov liečiv a na potvrdenie farmakokinetických vlastností liečiva počas metabolizmu liečiva. IF a IHC sú dve diagnostické metódy, ktoré sú založené na koncepcii väzby antigénu a protilátky, aj keď spôsob detekcie sa v obidvoch technikách líši. IF používa na detekciu antigénu princíp fluorescencie a IHC používa na detekciu antigénu koncept chemickej konjugácie. To je rozdiel medzi IF a IHC.
Stiahnite si PDF verziu imunofluorescencie vs. imunohistochémie
Môžete si stiahnuť verziu tohto článku vo formáte PDF a použiť ho na offline účely podľa citačnej poznámky. Stiahnite si tu PDF verziu. Rozdiel medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou.
