Kľúčový rozdiel - Nitrocelulóza vs. Nylonová membrána
Blotovanie je dôležitá technika na detekciu špecifických sekvencií DNA, RNA a proteínov z ich zmesí v molekulárnej biológii. Robí sa to pomocou membrány zvanej blot. Existujú rôzne techniky blokovania, ako je severné, južné a západné blokovanie. Je potrebné starostlivo zvoliť vhodnú membránu pre blotovací proces, aby sa zabránilo nešpecifickému viazaniu a nesprávnym detekciám. Nitrocelulóza, nylon a PVDF sa bežne používajú membrány pri blotovacích technikách. Majú rôzne vlastnosti. Kľúčovým rozdielom medzi nitrocelulózou a nylonovou membránou je, že nitrocelulózové membrány majú vysoký imobilizačný potenciál proteínov, zatiaľ čo nylonové membrány majú vysoký imobilizačný potenciál nukleových kyselín. Pri blotovacích technikách sa však často používajú oba typy membrán.
OBSAH
1. Prehľad a hlavný rozdiel
2. Čo je to nitrocelulózová membrána
3. Čo je to nylonová membrána
4. Porovnanie vedľa seba - nitrocelulóza vs. nylonová membrána
5. Zhrnutie
Čo je to nitrocelulózová membrána?
Nitrocelulózová membrána je bežne používaný membránový filter v technikách blotovania nukleových kyselín a proteínov. Má vysoký väzbový potenciál pre bielkoviny. Preto sú nitrocelulózové membrány široko používané v technike westernového prenosu. Nitrocelulózové membrány sú kompatibilné so všetkými hybridizačnými technikami a vykazujú vynikajúce väzbové kapacity bez interferencií. Nitrocelulózové membrány majú prirodzene hydrofilnú povahu. Uskutočňujú hydrofilnú interakciu s molekulami a účinne ich imobilizujú na membránu. Komerčné nitrocelulózové membrány sú dostupné v dvoch veľkostiach pórov: 0,45 a 0,2 um.
Obrázok 01: Nitrocelulózová membrána použitá pri Western blote
Čo je to nylonová membrána?
Nylonová membrána je ďalším typom komerčnej membrány používanej v blotovacích technikách. Alternatívne sa používa s nitrocelulózovými membránami na južné a severné blotovanie. Nylonové membrány sú ideálne pre Southern blot ako nitrocelulóza kvôli svojej vysokej afinite k väzbe s DNA. Vďaka niekoľkým jedinečným vlastnostiam nylonových membrán vedci bežne používajú nylonové membrány na južné a severné prenosy namiesto cez nitrocelulózovú membránu. Na rozdiel od nitrocelulózy sa na odstránenie a opätovné vyskúšanie odporúčajú aj nylonové membrány.
Obrázok 02: Nylonová membrána použitá na Southern blot
Aký je rozdiel medzi nitrocelulózou a nylonovou membránou?
Rozdielny článok v strede pred tabuľkou
Nitrocelulóza vs Nylonová membrána |
|
| Nitrocelulózové membrány sú krehké. | Nylonové membrány sú menej krehké. |
| Manipulácia | |
| Je ťažké s nimi manipulovať. | Ľahko sa s nimi manipuluje. |
| Opakovanie | |
| Nepodporované nitrocelulózové membrány je ťažké napomenúť. | Opätovné vyskúšanie je jednoduché pomocou nylonových membrán. |
| Kompatibilita s rôznymi podmienkami skladovania | |
| Nitrocelulózové membrány majú menšiu pevnosť, aby odolali rôznym skladovacím podmienkam. | Nylonové membrány robustnejšie reagujú na rôzne podmienky skladovania. |
| Použite | |
| Vyžaduje sa vopred zmáčanie. | U nylonových membrán sa predbežné navlhčenie nevyžaduje. |
| Hydrofilná povaha | |
| Nitrocelulózové membrány sú svojou povahou hydrofilné, ale sú menej hydrofilné ako nylonové membrány. | Sú vysoko hydrofilnej povahy. |
| Potenciál imobilizácie | |
| Nitrocelulózové membrány majú menšiu afinitu k nukleovým kyselinám. Ale má vysokú afinitu k proteínom. | Nylonové membrány majú vysoký väzbový potenciál s nukleovými kyselinami ako nitrocelulózové membrány. |
Zhrnutie - Nitrocelulóza vs Nylonová membrána
Nitrocelulózové a nylonové membrány sú špeciálne fólie, ktoré sa používajú blotovacou technikou na reprodukciu pruhovitého vzoru na géle. Umožňujú možnosť detekcie špecifickej sekvencie alebo proteínu zo zmesí ich imobilizáciou na membráne. Akonáhle sú molekuly imobilizované na membráne, môžu sa použiť ako substrát pre hybridizačnú analýzu so značenými sondami. Nitrocelulózová membrána sa bežne používa na detekciu proteínov v technike western blot kvôli vysokej väzbovej afinite k proteínom. Na južné a severné prenosy sa často používajú nylonové membrány. To je rozdiel medzi nitrocelulózou a nylonovou membránou.
