Rozdiel Medzi Benzonázou A DNázou

2024 Autor: Mildred Bawerman | [email protected]. Naposledy zmenené: 2023-12-16 08:42

Kľúčový rozdiel - benzonáza vs DNáza

Degradácia nukleových kyselín je dôležitá pre mnohé techniky molekulárnej biológie. Je široko používaný v technológii rekombinantnej DNA na zbavenie sa nežiaducich fragmentov DNA a RNA. Enzýmy degradujúce nukleové kyseliny sa označujú ako nukleázy a na základe požadovanej funkcie môžu byť rôzneho typu. Nukleázy, ktoré degradujú DNA, sú známe ako DNázy, zatiaľ čo tie, ktoré degradujú RNA, sú známe RNázy. Tieto enzýmy sa väčšinou používajú v in vitro experimentoch, kde sa in vitro uskutočňujú molekulárne testy na izoláciu čistej DNA, RNA alebo proteínov. Benzonázy sú typom nukleáz, ktoré degradujú DNA aj RNA, zatiaľ čo DNázy degradujú iba DNA. Toto je kľúčový rozdiel medzi benzonázou a DNázou.

OBSAH

1. Prehľad a hlavný rozdiel

2. Čo je benzonáza

3. Čo je to DNáza

4. Podobnosti medzi benzonázou a DNázou

5. Porovnanie vedľa seba - benzonáza vs. DNáza v tabuľkovej forme

6. Zhrnutie

Čo je benzonáza?

Benzonáza je geneticky upravená endonukleáza zo Serratia marcescens. Tento enzým sa produkuje v hostiteľoch E. coli v priemyselnom meradle. Benzonáza je schopná štiepiť dvojvláknovú DNA, lineárnu DNA, kruhovú DNA a jednovláknovú RNA. Benzonáza je teda komerčne dôležitá. Enzým benzonáza je dimér proteínu, ktorý má 245 identických aminokyselín, ~ 30 kDa podjednotiek s dvoma esenciálnymi disulfidovými väzbami. Benzonáza štiepi nukleové kyseliny na svojom 5 'konci a vedie k fragmentom s voľným 5' koncom. Benzonáza môže štiepiť nukleové kyseliny v ktorejkoľvek sekvencii, ale uprednostňuje oblasti bohaté na GC.

Benzonáza sa skladuje pri -20 ^° C. Optimálne pH pre aktivitu enzýmu je 8,0 - 9,2. Aplikácie benzonázy zahŕňajú prípravu vzoriek na gélovú elektroforézu s proteínom 2D, kde benzonáza odstraňuje viazané nukleové kyseliny a odstraňuje kontaminanty nukleových kyselín z rekombinantných proteínových prípravkov. Používa sa tiež na zníženie viskozity proteínových extraktov a zabránenie zhlukovania buniek v bunkovej zmesi.

Čo je to DNase?

DNáza je nukleáza, hydrolytický enzým, ktorý je schopný štiepiť iba dvojvláknovú DNA. Existujú dva hlavné typy DNáz: DNáza I a DNáza II. DNáza I sa podieľa na štiepení dvojvláknovej DNA za vzniku polynukleotidov s 5 'voľnými koncami. DNáza II sa podieľa na štiepení dvojvláknovej DNA za vzniku polynukleotidových vlákien s 3 'voľnými koncami alebo presahmi.

DNase I

DNáza I funguje pri optimálnom pH medzi 7,0 - 8,0. Aktivita enzýmu závisí od mnohých iónových kofaktorov, medzi ktoré patrí Ca2 ⁺, Mg2 ⁺ alebo Mn2 ⁺. O funkcii DNázy I rozhoduje aktivita Mg ²⁺ a Mn ²⁺. V prítomnosti Mg ²⁺ štiepi DNáza I každé vlákno dsDNA nezávisle. To sa deje náhodným spôsobom. Naopak, v prítomnosti Mn2 ⁺ enzým štiepi oba reťazce DNA na približne rovnakom mieste. Toto štiepenie povedie k produkcii dvoch typov fragmentov DNA; jeden typ s tupými koncami a druhý typ s jedným alebo dvoma nukleotidovými prevismi.

Obrázok 02: DNáza

DNáza II

DNáza II funguje pri optimálnom pH 4,5 - 5,0 a pre jej aktivitu sú potrebné dvojmocné kovové ióny, podobne ako DNáza I. Je známe, že mechanizmus DNázy II pozostáva z troch hlavných krokov.

1. V reťazci DNA je indukovaných viac zlomov jedného vlákna.
2. Vyrábajú sa kyslé rozpustné nukleotidy a oligonukleotidy.
3. V poslednej fáze nastáva nelineárny hyperchromatický posun.

Medzi hlavné inhibítory enzýmu DNáza patria chelátory kovov, prechodné kovy a chemikálie, ako je dodecylsulfát sodný a β - merkaptoetanol.

Medzi hlavné aplikácie DNázy patrí príprava extraktov RNA a proteínových extraktov bez DNA a odstránenie templátovej DNA počas transkripčných experimentov in vitro.

Aké sú podobnosti medzi benzonázou a DNázou?

• Oba sú hydrolytické enzýmy.
• Obe sú nukleázy.
• Oba sa zúčastňujú štiepením fosfodiesterových väzieb nukleových kyselín.
• Obidve vyžadujú optimálne pH a skladovacie teploty na udržanie aktivity enzýmu.
• Inhibítory enzýmov zahŕňajú chelatačné činidlá, prechodné kovy a detergenty.
• Aplikácie sú zamerané hlavne na získanie vysoko čistých extraktov DNA, RNA a proteínov.
• Oba enzýmy sa dajú vyrobiť pomocou genetického inžinierstva.

Aký je rozdiel medzi benzonázou a DNázou?

Rozdielny článok v strede pred tabuľkou

Benzonáza vs DNáza
Benzonáza je enzým, ktorý je schopný štiepiť dvojvláknovú DNA, lineárnu DNA, kruhovú DNA a RNA.	DNáza je enzým, ktorý je schopný štiepiť dvojvláknovú DNA.
Substrát pre enzým
DNA aj RNA sú substrátmi pre benzonázu.	DNA je substrátom pre DNázu.
Štruktúra
Optimálne rozmedzie pH benzonázy je 7,0 - 8,0	Optimálne rozsahy pH DNázy I sú 7,0 - 8,0 a DNázy II je 4,5 - 5,0.

Zhrnutie - benzonáza vs DNáza

Nukleázové enzýmy sa široko používajú v rôznych experimentálnych postupoch týkajúcich sa molekulárnej biológie a genetického inžinierstva. Benzonáza a DNáza sú dva typy nukleáz. Benzonáza sa podieľa na degradácii DNA aj RNA, zatiaľ čo DNáza sa podieľa na štiepení dvojvláknovej DNA. Toto je základný rozdiel medzi benzonázou a DNázou. V súčasnosti sa obidva tieto typy nukleáz vyrábajú technológiou rekombinantnej DNA, ktorá poskytuje kvalitnejšie enzýmy optimalizované na maximálnu produkciu.

Stiahnite si PDF verziu benzonázy vs DNase

Môžete si stiahnuť verziu tohto článku vo formáte PDF a použiť ho na offline účely podľa citačnej poznámky. Stiahnite si tu PDF verziu. Rozdiel medzi benzonázou a DNázou