Kľúčový rozdiel - Phusion vs Taq polymeráza
DNA polymerázy sú široko používané enzýmy v technikách molekulárnej biológie a sú tiež prirodzene prítomné vo všetkých organizmoch, ktoré prechádzajú replikáciou DNA. Sú to kľúčové polymerizujúce enzýmy, ktoré sa zúčastňujú počas replikácie. DNA polymeráza je schopná pridávať nukleotidy na voľný 3 'koniec reťazca DNA, a tým spôsobiť rozšírenie nového reťazca. V súčasnosti je z dôvodu vývoja molekulárnej biológie v diagnostike chorôb a priemyselných aplikáciách dôležitá výroba polymeráz, ktoré majú rôzne prospešné vlastnosti. To zvyšuje presnosť metódy a robí z nej rýchlejšiu techniku. Fúzia a Taq polymeráza sú dva komerčne vyrábané termostabilné polymerázové enzýmy, ktoré sa používajú v špeciálnych molekulárnych aplikáciách. Fúzia je DNA polymeráza izolovaná z Pyrococcus furiosus a používa sa hlavne v klonovacích experimentoch na zvýšenie vernosti. Taq DNA polymeráza je štandardná DNA polymeráza používaná pri polymerázovej reťazovej reakcii (PCR) a je izolovaná z termostabilnej baktérie; Thermus aquaticus. Kľúčovým rozdielom medzi týmito dvoma enzýmami je zdrojový mikroorganizmus. Fúzia sa izoluje z extremofilu Pyrococcus furiosus, zatiaľ čo polymeráza Taq sa izoluje z termofilu Thermus aquaticus. Taq polymeráza sa izoluje z termofilu Thermus aquaticus. Taq polymeráza sa izoluje z termofilu Thermus aquaticus.
OBSAH
1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je to fúzia
3. Čo je to Taq polymeráza
4. Podobnosti medzi fúziou a Taq polymerázou
5. Porovnanie vedľa seba - Phusion vs. Taq polymeráza v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie
Čo je to Phusion?
Fúzna DNA polymeráza je nová polymeráza, ktorá sa vyrába izoláciou enzýmu z Pyrococcus furiosus, čo je extrémofilná Archea. Tieto mikróby žijú v podmienkach extrémne vysokej teploty, čo z polymerázy robí vysoko stabilnú polymerázu. Fúzna polymeráza sa používa na získanie extrémnej vernosti oproti bežnej termostabilnej polymeráze; Taq polymeráza. Fúzna polymeráza je schopná amplifikovať dlhé templáty až do 7,5 kb genómovej DNA. Optimálna polymerizačná kapacita fúznej polymerázy je 72 ° C. Fúzia sa tiež používa pri klonovaní produktov na sekvenovanie, expresnú analýzu a mutačnú analýzu.
Fúzna DNA polymeráza má 3 '- 5' exonukleázovú aktivitu. To umožňuje korektúru novo syntetizovaného vlákna po syntéze. Preto sa nukleotidové nesúlady dajú ľahko opraviť. Má teda menšiu chybovosť. Celkové výhody fúznej polymerázy sú;
- Extrémna vernosť
- Vysoká rýchlosť a skrátený čas predĺženia
- Robustné reakcie a vyžaduje minimálnu optimalizáciu
- Vysoký výnos
Obrázok 01: Fúzia
Hlavnou nevýhodou fúznej polymerázy je to, že je inhibovaná v prítomnosti deoxyuridíntrifosfátu (dUTP). Keď sa dUTP akumulujú v reakčnej zmesi, môže inhibovať účinky fúznej polymerázy. Tomu sa zabráni pôsobením dUTPázy na reakčnú zmes pred pridaním enzýmu. V súčasnosti sa ako riešenie tohto problému namiesto fúznej polymerázy používa variant fúznej polymerázy odolný voči dUTP známy ako Pfu Turbo.
Čo je to Taq polymeráza?
Vynález Taq DNA polymerázy priniesol revolúciu v oblasti molekulárnej biológie. Vyriešil hlavný problém v amplifikácii DNA. Taq DNA polymeráza je tepelne stabilný polymerázový enzým extrahovaný a izolovaný z termofilnej baktérie Thermus aquaticus. Objav týchto enzýmov vedie k rozvoju PCR. Tento enzým umožnil použitie polymerázovej reťazovej reakcie pri amplifikácii DNA namiesto bežných namáhavých klonovacích techník. PCR sa teraz používa v molekulárnej diagnostike, poľnohospodárstve a priemysle a do techniky sa pridáva veľa nových variácií.
Obrázok 02: Taq polymeráza
Taq DNA polymeráza funguje pri optimálnom teplotnom rozmedzí medzi 72 0 C - 80 0 C. Taq DNA polymeráza vyžaduje kofaktor; horčík pre svoju funkciu. Taq polymeráza nemá schopnosť korektúry 3 '- 5', preto je chybovosť Taq DNA polymerázy vysoká v porovnaní s novšími typmi DNA polymeráz, ako je Phusion polymerase atď. Popularita Taq DNA polymerázy však zostáva rovnaké vo celom svete vedy kvôli pohodliu a flexibilite enzýmu.
Aké sú podobnosti medzi fúziou a Taq polymerázou?
- Fúzne aj Taq polymerázové enzýmy sú polymerizujúce enzýmy, ktoré sú schopné pridávať nukleotidy na 3 'voľný koniec reťazca DNA.
- Fúzna aj Taq polymeráza vyžadujú na zahájenie polymerizácie primérovú sekvenciu.
- Fúzne aj Taq polymerázy sú tepelne stabilné.
- Fúzne aj Taq polymerázy sa používajú v mechanizmoch PCR na amplifikáciu DNA.
- Pri pridávaní polymerázy k reakčnej zmesi sa ako posledná pridáva polymeráza Phusion aj Taq, aby sa zaistila účinnosť enzýmu.
- Fúzne aj Taq polymerázy sú komerčne syntetizované na experimentálne účely molekulárnej biológie.
- Fúzna aj Taq polymeráza vyžadujú na doplnenie svojej funkcie kofaktor.
Aký je rozdiel medzi fúziou a Taq polymerázou?
Rozdielny článok v strede pred tabuľkou
Fúzia vs Taq polymeráza |
|
| Fúzia je DNA polymeráza izolovaná z Pyrococcus furiosus a používa sa hlavne v klonovacích experimentoch na zvýšenie vernosti. | Taq DNA polymeráza je štandardná DNA polymeráza používaná pri polymerázovej reťazovej reakcii (PCR) a je izolovaná z termostabilnej baktérie Thermus aquaticus. |
| Zdrojový organizmus | |
| Fúzia sa extrahuje z extremofilnej archy - Pyrococcus furiosus. | Tieto literárne diela siahajú od obdobia kolonizácie po obdobie dekolonizácie. |
| Schopnosť korektúry čítania | |
| Schopnosť korektúry čítania 3 '- 5' je prítomná v aplikácii Phusion. | Schopnosť čítania 3 '- 5' v Taq polymeráze chýba. |
| Vernosť | |
| Vysoká vernosť je tam s Phusion. | Taq polymeráza vykazuje nízku vernosť. |
| Zosilnenie | |
| Fúzia je schopná amplifikovať dlhé fragmenty DNA. | Taq polymeráza je schopná amplifikovať oveľa kratšie fragmenty DNA. |
| otrava dUTP | |
| Fúzna činnosť je inhibovaná akumuláciou nepárne. | Taq polymeráza nie je inhibovaná dUPT. |
Zhrnutie - Phusion vs Taq polymeráza
Fúzia a Taq DNA polymeráza sú dve tepelne stabilné polymerázy, ktoré sa používajú v technikách PCR. Fúzia je polymeráza izolovaná z extremofilu Pyrococcus furiosus, zatiaľ čo Taq je izolovaná z termostabilnej baktérie Thermus aquaticus. Objavenie Taq DNA polymerázy vedie k vynálezu PCR. Phusion má oproti Taq mnoho výhod, vďaka ktorým je z Phusion lepšia voľba pri produkcii DNA s vysokou vernosťou. Avšak Taq polymeráza sa stále používa ako štandardný polymerázový enzým v PCR. To je rozdiel medzi Phusion a Taq polymerázou.
