Rozdiel Medzi Prechodnou A Stabilnou Transfekciou

2024 Autor: Mildred Bawerman | [email protected]. Naposledy zmenené: 2023-12-16 08:42

Kľúčový rozdiel - prechodná vs stabilná transfekcia

Transfekcia je proces, ktorý spočíva v génovom prenose eukaryotických buniek pomocou chemických alebo fyzikálnych metód. Transfekciu je možné rozdeliť do dvoch hlavných typov: prechodná transfekcia a stabilná transfekcia. Počas prechodnej transfekcie sa požadovaný gén neintegruje s hostiteľským genómom a je krátkodobo dočasne exprimovaný v hostiteľovi, zatiaľ čo pri stabilnej transfekcii sa požadovaný gén integruje s hostiteľským genómom a udržiava sa dlhodobo po niekoľko generácií.. Toto je kľúčový rozdiel medzi prechodnou a stabilnou transfekciou. V obidvoch prípadoch je transfekcia úspešná a dôjde k expresii génov.

OBSAH

1. Prehľad a hlavný rozdiel

2. Čo je prechodná transfekcia

3. Čo je stabilná transfekcia

4. Porovnanie vedľa seba - prechodná vs. stabilná transfekcia

5. Zhrnutie

Čo je prechodná transfekcia?

Transfekcia je dôležitým nástrojom na inzerciu génov do eukaryotických buniek. Spomedzi dvoch typov transfekcie je prechodná transfekcia bežným spôsobom prenosu génov. Cez vektor sa cudzie gény transformujú vo vnútri hostiteľských buniek. Akonáhle cudzia DNA vstúpi do hostiteľskej bunky, má dve možnosti. Môže sa buď integrovať do hostiteľského genómu a replikovať sa, alebo zostať vo vnútri bez toho, aby sa integroval do genómu. Prechodná transfekcia vykazuje dočasnú expresiu vložených génov bez integrácie do hostiteľského genómu. Gény exprimujú a produkujú kódovaný proteín, kým sa bunka nerozdelí. Kvôli nemožnosti integrácie sa však nemôže replikovať a vstupovať do budúcich generácií. Tento typ transfekcie je na krátky čas úspešný. Počas bunkového delenia alebo v dôsledku niektorých ďalších faktorov je cudzia DNA podrobená degradácii. Prechodná transfekcia sa ukáže, keď je cudzia DNA vo forme vysoko stočenej DNA.

Obrázok 01: Prechodná transfekcia

Čo je stabilná transfekcia?

Stabilná transfekcia ukazuje úspešnú integráciu cudzieho génu do genómu hostiteľa. Akonáhle cudzia DNA vstúpi do hostiteľskej bunky, časť cudzej DNA sa integruje s hostiteľským genómom a stane sa jeho súčasťou. Preto sa cudzia DNA tiež replikuje a prechádza do ďalších generácií, keď sa replikuje hostiteľský genóm. Tento typ transfekcie je zložitý a zriedkavý. Vďaka stabilnej transfekcii do genómu si však táto vlastnosť zachováva dlhšiu dobu niekoľko generácií.

Stabilná transfekcia je náročný proces a vyžaduje účinné dodanie DNA a bunkové získanie cudzej DNA do jej genómu. Preto lineárna DNA uprednostňuje stabilnú transfekciu ako kruhová DNA. Avšak trvalá transfekcia rýchlosť je približne raz za 10 ⁴ transformovaných bunkách. Stabilnú transfekciu je možné pozorovať kotransfomáciou selekčného markeru a uskutočnením umelej selekcie na médiu.

Obrázok 02: Stabilná transfekcia

Aký je rozdiel medzi prechodnou a stabilnou transfekciou?

Rozdielny článok v strede pred tabuľkou

Prechodná vs stabilná transfekcia
Cudzia DNA sa neintegruje do hostiteľského genómu.	Cudzia DNA sa integruje s hostiteľským genómom a stáva sa jeho súčasťou.
Replikácia v rámci hostiteľa
Prechodne transfekované gény sa v hostiteľovi nereplikujú. Gény preto neprechádzajú na ďalšie generácie.	Gény sa replikujú v hostiteľovi a odovzdávajú sa ďalším generáciám.
Časové trvanie génovej expresie
Gény sú exprimované po konečnú dobu a potom sú zničené.	Gény sa stávajú súčasťou genómu a exprimujú sa počas generácie po dlhú dobu.
Použite
To je užitočné na štúdium účinkov krátkodobej expresie génov alebo génových produktov.	To je užitočné pri dlhodobom štúdiu účinkov génovej expresie.
Zistenie transfekcie
Gény sú exprimované a dajú sa ľahko detekovať inzerciou reportérového génu.	Stabilnú transfekciu je možné ľahko zistiť vložením voliteľného markeru a selekciou prostredníctvom umelej selekcie na médiu.
Výskyt a proces
Prechodná transfekcia je bežná a nie je zložitá.	Stabilná transfekcia je zriedkavá a je zložité ju vykonať.
Povaha DNA
Na prechodnú transfekciu je vhodná vysoko navinutá DNA.	Lineárna DNA je vhodná na stabilnú transfekciu.
Aplikácie
Toto sa používa na štúdium knockdownu alebo umlčania génov pomocou inhibičných RNA, produkcie proteínov v malom meradle	Používa sa na produkciu bielkovín vo veľkom rozsahu, dlhodobejšie farmakologické štúdie, génová terapia, výskum mechanizmov dlhodobej genetickej regulácie.

Zhrnutie - prechodná vs stabilná transfekcia

Prechodné a stabilné transfekcie sú dva typy transfekcií, ktoré sa prejavujú počas prenosu génu do eukaryotických buniek pomocou nevírusových systémov. Transformovaná cudzia DNA nie je integrovaná s hostiteľským genómom pri prechodnej transfekcii, zatiaľ čo sa integruje s hostiteľským genómom pri stabilnej transfekcii. Kruhová stočená DNA je znázornená prechodná transfekcia, zatiaľ čo lineárna DNA uprednostňuje stabilnú transfekciu. To je rozdiel medzi prechodnou a stabilnou transfekciou. Prechodná transfekcia je však bežnejšia a ľahšia v porovnaní so stabilnou transfekciou. Ale výber jedného z dvoch závisí od účelu génového prenosu a trvania výskumného projektu.